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新型防腐剂纳他霉素的应用研究上

时间:2021-08-18 来源网站:西安化工机械网

新型防腐剂纳他霉素的应用研究(上)

纳他霉素(Natamycin)是一种多烯大环内酯类抗真菌剂[1],也称游链霉素(Pimaricin)。它是由5个多聚乙酰合成酶基因编码的多酶体系合成[2]。由于它能够专性地抑制酵母菌和霉菌,被广泛应用于食品防腐和真菌引起的疾病的治疗。

纳他霉素首次分离得到了是在1955年的南非,产生菌是纳塔尔链霉菌(Streptomyces natalensis)。1982年6月,美国食品与药品管理局(FDA)正式批准纳他霉素可用作食品防腐剂。在美国,纳他霉素已被批准用于奶酪的保存,并且未限制其使用方式,可以用浸润,喷雾,以及和安全合适的消结块剂混合使用,但最终成品中纳他霉素的浓度必须低于20mg/kg[3]。

1997年3月,我国卫生部正式批准纳他霉素作为食品防腐剂,其商品名称为霉克(NatamycinTM)。我国现已批准使用的防腐剂有30种,除曲酸(Kojic acid)、乳酸链球菌肽(Nisin)和纳他霉素(Natamycin)外,其余均为化学防腐剂。纳他霉素在实际中的使用量为10-6数量级。因此,它是一种高效、安全的新型生物防腐剂。

目前,瑞士这样对食品安全非常重视的国家也允许在面包和奶酪产品中使用纳他霉素。纳他霉素已经在很多国家得到广泛使用,包括欧盟,大部分北美和东欧国家,以及一些中东国家。

1 纳他霉素的结构和性质

纳他霉素是近白色至奶油黄色结晶粉末,几乎无臭无味,溶点280℃(分解),分子式C33H47O13,相对分子量665.75u,结构式如图1所示。纳他霉素是一类两性物质,分子中有一个碱性基团和一个酸性基团,等电点为6.5。

纳他霉素在水中和极性有机溶剂中溶解度很低,不溶于非极性溶剂,室温下在水中的溶解度为30~50mg/l。易于溶于碱性和酸性的水溶液中。转变为胆酸盐形式后溶解度可以迅速增加。纳他霉素的低水溶性不利于它的生物利用度。因为溶解的纳他霉素必须扩散到目标物的活性部位,并且和目标物结合才能发挥作用[4]。

在大多数食品的pH值范围内,纳他霉素是非常稳定的。高温、紫外线、氧化剂及重金属等会影响纳他霉素低的稳定性[5]。但可以瞬时高温(温度可达100℃)不影响其活性。N-Natamycin(3-N-dimethylaminopropylsuccimido)的活性比较低,可能是对它的化学修饰都会降低其活性[6],纳他霉素是经深层发酵和多步提取工艺精制而成,其制剂通常是50%纳他霉素和50%乳糖的混合物。

2 纳他霉素的抑菌作用机制

纳他霉素是26种多烯烃大环内酯类抗真菌剂的一种,多烯是一平面大环内酯环状结构,纳他霉素分子的疏水部分即大环内酯的双键部分以范德华力和真菌细胞质膜上的甾醇分子结合,形成抗生素-甾醇复合物,破坏细胞质膜的渗透性;分子的亲水部分即大环内酯的多醇部分则在膜上形成水孔,损伤膜的通透性,从而引起菌内氨基酸、电解质等重要物质渗出而死亡[7]。但有些微生物如细菌的细胞壁及细胞质膜不存在这些类甾醇化合物,所以纳他霉素对细菌没有作用。

3 纳他霉素的生产工艺

纳他霉素的生产菌种主要有Streptomyces chattanovgensis,Streptomyces natulonso,Streptomyces gilvo-sporeus等3种链霉菌。

杨东靖等根据分子育种中链霉菌产抗生素能力与链霉素抗性基因之间的对应关系,利用链霉素抗性突变作为筛选标记,快速高效地得到了高产菌株SG56,并对其发酵工艺进行了研究[8]。研究发现SG56纳他霉素的产量比原始菌种提高了146%。在经过发酵条件优化以后,SG56的纳他霉素最终产量达到2.81g/l,是出发菌株产量的170%。

3.1 发酵工艺

美国专利报道[9],Streptomyces gilvosporeus菌经发酵罐放大培养总发酵周期为250h,发酵在好氧条件下进行,搅拌速度在不同时期有所不同,在发酵第一阶段的搅拌速度为500r/min,到发酵第二阶段,由于产物及代谢物的积累,产物的产生速率有所下降,故应适当增加搅拌速度以保持发酵罐内足够的溶解氧水平;同时还要持续地抽去发酵罐中的旧培养液,并以与之相同的速率向发酵罐中添加新培养液,这样就避免有害代谢物在发酵罐中过度积累,及时补充新鲜的营养成分。另外,在发酵后期,添加的新鲜培养液各营养成分的浓度比原来的培养液都有所增加,这也有利于产物的生成,进一步提高产量。

在发酵过程中,培养液中各成分的浓度和类型都会影响纳他霉素的生物合成,其中碳氮比是最关键的因素之一,氮源促进菌体的生长繁殖,同时要在发酵中流加补充适当的碳源(葡萄糖)。纳他霉素在以葡萄糖作为碳源时产量最高,这是因为葡萄糖能渗入纳他霉素的分子中去[10]。在发酵前期葡萄糖的浓度为40g/l,到发酵后期则为20g/l,此时菌体生长和纳他霉素的产量均达到最佳值。该生产工艺中所用的氮源是大豆蛋白抽提物与酵母抽提物的混合物。有资料表明[11],氮源的类型对菌体生长和纳他霉素的产量有较大影响,菌体细胞生长最好的氮源是酵母抽提物,而纳他霉素产生的最佳氮源是牛肉浸出物。所以,将两种氮源混合使用则使纳他霉素的产量增加两倍。Eisenschink等[12]用非酵母蛋白和酵母蛋白的混合物作为培养基中的氮源,得到较高产量的纳他霉素。 (待续)

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